Что такое тинкториальные свойства

Содержание
  1. Тинкториальные свойства – это что такое?
  2. Задачи, которые решает метод окрашивания
  3. Подготовка образца и его окраска
  4. Распространенные красители
  5. Витальный способ
  6. Поствитальный способ
  7. Окрашивание спор
  8. Структурные особенности микробов
  9. Стрептококки
  10. Сальмонеллы
  11. Менингококки
  12. Холерный вибрион
  13. Кишечная палочка
  14. Нейтрофилы
  15. Базофилы
  16. Эозинофилы
  17. Идентификация микробов
  18. Определение свойств микроорганизмов
  19. Морфологические и тинкториальныe свойства
  20. Резистентность микробов к различным факторам окружающей среды
  21. Особенности физиологии и биохимической активности
  22. Антигенная структура и отношение к бактериофагу
  23. Патогенность для животных
  24. Тинкториальные свойства – способность микроорганизмов окрашиваться
  25. Для чего нужно окрашивание?
  26. Особенности разных бактерий при окрашивании
  27. Стафилококки
  28. Энтеробактерии
  29. Эшерихии
  30. Структурные особенности бактерий
  31. Окрашивание стрептококков
  32. Окрашивание стафилококков
  33. Окрашивание пневмококков
  34. Гранулоциты
  35. Тинкториальные свойства — основа микроскопирования бактерий
  36. Исследование микробов
  37. Зачем их красить
  38. Подготовка образца
  39. Культура живая или мертвая
  40. Грамположительные и грамотрицательные
  41. Другие методики окрашивания

Тинкториальные свойства – это что такое?

Что такое тинкториальные свойства

Прежде чем исследовать микроорганизмы под микроскопом, изучаемый образец подвергают специальной подготовке. В естественном виде практически все бактерии прозрачны, поэтому их окрашивают красителями. Окрашивание позволяет определить как морфологические свойства исследуемых микробов, так и принадлежность их к тому или иному виду.

Способность микроорганизмов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами. С их помощью биологи определяют вид микроба, его параметры, особенности структур, а также выявляют возбудителей инфекционных заболеваний. Из этой статьи вы подробнее узнаете, что это – тинкториальные свойства, а также как их используют в науке.

Задачи, которые решает метод окрашивания

Первым делом давайте выясним, в чем значение тинкториальных свойств микроорганизмов. Окрашивание образца является одной из ключевых техник микробиологии, позволяющих изучить как внешнее, так и внутреннее строение организмов. Бактерии являются полупрозрачными микроорганизмами, преломляющими лучи света.

Поэтому при обычном микроскопировании их нельзя рассмотреть. Разные части бактерии по-разному взаимодействуют с красителем. Тинкториальные свойства – это отличная возможность для исследователей.

Будучи разными у различных микроорганизмов, они позволяют определить их важнейшие характеристики: форму, размер, строение, локализацию и прочее.

Подготовка образца и его окраска

Независимо от того, какую методику окрашивания практикует исследователь, данная процедура состоит из ряда обязательных стадий:

  1. Приготовление образца. В каплю воды, размещенную на предметном стекле, с помощью бактериологической петли вносят изучаемый материал.
  2. Сушка мазка. Проводится при комнатной температуре, либо в потоке теплого воздуха (но не слишком близко к источнику тепла).
  3. Фиксация. Предполагает закрепление микроорганизмов на стекле, с целью усиления их восприимчивости к окрашиванию.
  4. Окраска. На исследуемый образец наносят краситель и дают ему какое-то время постоять. Затем остатки красителя удаляют и промывают образец водой.
  5. Сушка. Заключительная стадия, позволяющая избавиться от остатков воды после промывки. После сушки образец готов к изучению под микроскопом.

Распространенные красители

Окрашивание образцов проводят с помощью анилиновых красителей, с разным показателем кислотности (рН). Их подразделяют на: основные (ударение на вторую букву о), кислотные и нейтральные.

В основных красителях действующим агентом выступает катион. С помощью различных реагентов можно получить разные цвета окрашивания микробов:

  1. Красный – пиронин, сафранин, нейтральрот, фуксин основной.
  2. Фиолетовый – тионин, метил-, генциан- и кристаллвиолет.
  3. Синий – метиленовая синь и виктория.
  4. Зеленый – малахитовая и метиленовая зелень.
  5. Черный – индулин.
  6. Коричневый – везувин и хризоидин.

В кислотных красителях красящими свойствами наделен анион. Из них наиболее распространены:

  1. Красный – кислый фуксин и эозин.
  2. Черный – нигрозин.
  3. Желтый – пикроновая кислота.

Нейтральные красители могут окрашивать как анионы, так и катионы. В качестве яркого примера таковых можно назвать родамин В.

Существующие методы окрашивания, основанные на тинкториальных свойствах микроорганизмов, можно разделить на три главных типа: витальный, поствитальный и окрашивание спор. На каждом из этих методов остановимся подробнее.

Витальный способ

Данный метод также называется прижизненным, следовательно, окрашивание производится с целью микроскопирования живых организмов. Введение красящего препарата позволяет исследовать особенности внутриклеточных структур и тканей. Есть также методики витального окрашивания, предполагающие умерщвление образца сразу после окраски.

Для прижизненного окрашивания используют специальные красители, отличающиеся низкой токсичностью и высокой проникающей способностью. Кроме витальных препаратов, для решения этой задачи применяют также флуорохромы или флуоресцентные красители.

Поствитальный способ

В отличие от предыдущего варианта, здесь окрашивание производят после умерщвления микроорганизмов. Методы поствитального окрашивания подразделяют на простые и сложные.

Простые позволяют определить морфологические свойства исследуемых организмов: форму, размер, локализацию, взаиморасположение. Сложные же методы являются узконаправленными и позволяют получить сведения о структуре микроорганизма.

Чаще всего сложные способы окрашивания носят имена своих создателей. Из них наибольшей популярностью пользуются следующие методики.

Метод Грама. Способ, разработанный еще в конце 19 века, базируется на дифференциации микробов по проницаемости клеточных стенок.

С помощью обработки образца анилиновыми красителями (генциановым фиолетовым или метиловым) и последующей промывки исследователь получает два типа микробов: грамположительные (характерная синяя окраска) и грамотрицательные (обеспеченные).

Для того чтобы получить более полную картину, используется также красный краситель, после обработки которым даже грамотрицательные микроорганизмы приобретают окраску – от розовой до красной.

Методика Грама позволяет классифицировать микробы и провести их разделение по тинкториальным свойствам. Это один из наиболее простых и распространенных методов подготовки образца для микроскопирования. Прикладное значение данной методики заключается в диагностике различных инфекционных заболеваний.

Метод Циля-Нильсена. Этот способ был разработан также в конце XIX века. Он основывается на определении кислотоустойчивости бактерий с помощью окрашивания. Этим методом, благодаря тинкториальными свойствам микроорганизмов, можно выявить возбудители туберкулеза, лепры и микобактериоза.

Методика Романовского-Гимзе. Этот способ был разработан уже в начале двадцатого века. Его суть состоит в том, что после окрашивания образца специальным красителем ацидофильные бактерии приобретают различные оттенки красного цвета, а базофильные – от пурпурного до синего.

Ацидофилами называют молочно- и уксуснокислые бактерии, для жизнедеятельности которых необходима низкая кислотность среды. Базофилы же представляют собой микробов, которые могут быть окрашены основными красителями. Таким образом, метод базируется на разделении микробов по значению кислотности среды. Его широко применяют в изучении морфологии простейших и спирохет.

Методика Бурри-Гинса. Позволяет определить наличие у бактерий капсул.

Метод Морозова. Данный способ окраски дает возможность сделать жгутики бактерий видимыми. Для этого необходимо произвести такие манипуляции:

  1. Обработать образец кислотой, чтобы жгутики разрыхлились.
  2. Зафиксировать разрыхленные ткани танином.
  3. Окрасить образец азотнокислым серебром.

В результате бактерия, со всеми своими жгутиками, становится видимой. Ее цвет может колебаться от желтого до коричневого.

Окрашивание спор

Тинкториальные свойства микроорганизмов позволяют с помощью окраски сделать заметными их споры. Для этого чаще всего используют методику Циля-Нильсона. Ее суть состоит в обработке исследуемого образца фуксином Циля и его дальнейшем обесцвечивании с помощью однопроцентной серной кислоты. В результате споры окрашиваются в розовый цвет и хорошо выделяются на фоне синей бактерии.

Получить видимую картину спор позволяет также методика Ожешко. Согласно этому методу, оболочки спор сначала протравливают при высокой температуре кислотой, а затем используют окрашивание по Цилю-Нильсону.

Структурные особенности микробов

Клетка микроорганизма обычно состоит их стенок (оболочка), цитоплазматической мембраны, цитоплазмы, содержащей в своем составе нуклеотид и включения. Некоторые разновидности микробов также обладают жгутиками, фимбриями или ресничками, и могут образовывать капсулы или споры.

Оболочка микроорганизма обусловливает его форму, а также защищает его от неблагоприятной окружающей среды и осмотического внутреннего давления. Стенки микробов имеют довольно сложные химический состав и структуру.

У грамположительных и грамотрицательных клеток они отличаются. Первые имеют толстую клеточную стенку, содержащую тейхоевые кислоты и немного липидов. Стенка вторых состоит их полипептидного и полисахаридного слоев.

Снаружи клеточная стенка покрывается слизистым слоем. У некоторых микробов он может увеличиваться (набухать) образуя капсулу, состоящую преимущественно из полисахаридов, а иногда, полипептидов.

Она маловосприимчива к окрашиванию. Именно поэтому такие микробы изучают с помощью метода Бурри-Гинса.

У некоторых патогенных микробов (к примеру, пневмококка) капсула образуется только в организмах животных либо человека.

При исследовании микробов под микроскопом внимание также обращается на окрашиваемость цитоплазмы и ее структур.

Цитоплазма может окрашиваться гомогенно (однородно) или гетерогенно (присутствуют включения органической или неорганической природы).

Для изучения включений используют специальные методики окрашивания (например, по Нейссеру). Кроме того, в составе цитоплазмы определяют наличие ядра или нуклеотида.

Узнав, что это – тинкториальные свойства и то, как они помогают в микроскопировании, рассмотрим особенности некоторых распространенных микробов.

Стрептококки

С точки зрения тинкториальных свойств стрептококки являются грамположительными микроорганизмами, поэтому их определяют по методу Грама. Наиболее яркое окрашивание этих бактерий происходит при воздействии синькой Лаффера. Структура расположения их клеток напоминает цепочку.

Сальмонеллы

Представляют собой факультативные анаэробы, большинство из которых подвижно благодаря наличию жгутиков. На плотной питательной среде сальмонеллы собираются в круглые бело-серые колонии.

Спор не образуют, имеют перитрихи и микрокапсулу. Как и стрептококки, сальмонеллы окрашиваются по методу Грама.

Разница заключается в том, что по своим тинкториальным свойствам сальмонеллы грамотрицательны.

Менингококки

Имеют округленную полиморфную форму. На питательной среде располагаются попарно. Тинкториальные свойства менингококков таковы, что они грамотрицательны, однако на окраску по Граму реагируют недостаточно четко. Неравномерное окрашивание обуславливается тем, что чем старее клетка, тем слабее ее тинкториальные свойства. Жгутиков менингококки не имеют, а спор не образуют.

Холерный вибрион

Данный микроб имеет один полярный жгутик, который снабжен чехликом и ундулирующей мембраной. Холерный вибрион имеет выраженную подвижность. Для него характерен полиморфизм. Тинкториальные свойства холерного вибриона обуславливают его окрашивание анилиновыми красителями. Как правило, это водный фуксин Пфейфера или карболовый фуксин Шля.

Кишечная палочка

Представляет собой факультативный анаэроб, не образующий спор. Клетки имеют форму палочек с закругленными концами. Тинкториальные свойства кишечной палочки относят ее к грамотрицательным бактериям. Штаммы бактерий с перитрихально расположенными жгутиками могут передвигаться.

Нейтрофилы

Такое название микробы получили благодаря своим тинкториальным свойствам. Нейтрофилы могут интенсивно окрашиваться по методу Романовского, как основными красителями, так и кислотным эозином.

Взрослые бактерии имеют сегментированное ядро, а значит, относятся к полиморфонуклеарам. Они наделены адгезивностью, подвижностью, а также способностью к хемотаксису и захвату частиц.

Вместе с базофилами и эозинофилами относятся к гранулоцитам.

Базофилы

По аналогии с предыдущими микробами, эти бактерии получили свое название благодаря тинкториальным свойствам. Базофилы интенсивно окрашиваются основным красителем и совсем не окрашиваются кислым эозином. Они имеют крупные гранулоциты и содержат много: гистамина, серотонина, простагландинов, лейкотриенов и прочих медиаторов воспалительных и аллергических процессов.

Эозинофилы

В отличие от двух предыдущих гранулоцитов, эти микробы интенсивно окрашиваются только кислым красителем, и вовсе не окрашиваются основными препаратами. Эозинофилы наделены способностью к экстравазации, хемотаксису и амебоидному движению. Они могут поглощать и связывать ряд медиаторов воспалительных и аллергических реакций.

Источник: https://FB.ru/article/356191/tinktorialnyie-svoystva---eto-chto-takoe

Идентификация микробов

Что такое тинкториальные свойства

Идентификация микробов (позднелат. identificare отождествлять) — определение видовой или типовой принадлежности микробов. И. м.

— важнейший этап микробиол, исследования, необходимый для определения этиологии инфекционного заболевания; она имеет большое значение для эпидемиол, анализа вспышек инфекционных заболеваний и проведения эффективных мероприятий по их ликвидации. И. м. также широко используется при сан.-гиг. оценке почвы, воздуха, воды и пищевых продуктов.

И. м. осуществляется путем изучения комплекса морфол., культуральных, биохим.

, антигенных, патогенных и других свойств данной культуры, что позволяет установить ее идентичность (тождество) типичным представителям, определенного вида (типа) микроорганизмов.

Для этих исследований, как правило, необходимо располагать чистой культурой, поскольку присутствие посторонних микробов может послужить поводом для ошибочных заключений.

Выбор методов исследования для И. м. в значительной мере определяется источником выделения микроба (напр., материалом, полученным от больного, из трупа или объектов окружающей среды).

Определение свойств микроорганизмов

Общих схем И. м., применяемых в практике, не существует. Для каждой группы микроорганизмов идентификация осуществляется на основе их биол, особенностей. Так, для идентификации вирусов (см.

) важное значение имеют виды клеточных культур, в которых происходит их размножение, характер цитопатического действия, образование включений, антигенная структура, в некоторых случаях морфология вирусов, а также патогенность вирусов для экспериментальных животных .

В идентификации риккетсий (см.) значение имеют изучение их морфологических свойств, особенностей внутриклеточного паразитизма, антигенных свойств и т. д. При идентификации представителей грибков, актиномицетов и простейших значение имеют морфол, особенности возбудителя (см.

Актиномицеты, Грибки паразитические, Простейшие). Основными признаками в идентификации микоплазм являются их морфол., культуральные и антигенные свойства (см. Mycoplasmataceae). Бактерии идентифицируют на основе комплексного изучения их морфол., тинкториальных, культуральных, биохим.

, антигенных, фаголизабельных, бактериоциногенных и патогенных свойств.

Заслуживает внимания предложение некоторых исследователей [Кауэн и Стил (S. Т. Cowan, К. I. Steel), 1961, 1965; Сили и Ван-Демарк (H. W. Seeley, В. I. Van Demark), 1972] использовать в качестве исходного пункта идентификации бактерий окраску по Граму.

На первой стадии дифференцирования грамположительных бактерий авторы учитывают форму клетки, кислотоустойчивость, спорообразование, подвижность, продукцию каталазы, оксидазы, отношение к глюкозе, а грамотрицательных бактерий — форму клетки, подвижность, продукцию каталазы, оксидазы и отношение к глюкозе.

На последующих стадиях исследования, пользуясь таблицами, характеризующими бактерии, относящихся к определенному роду, находят ключ к определению видов, подвидов и типов.

Морфологические и тинкториальныe свойства

Изучение морфол, и тинкториальных признаков микроба является обычно лишь первоначальной стадией его идентификации. Морфология микроорганизмов изучается путем микроскопии фиксированных и окрашенных препаратов, а также живых неокрашенных микроорганизмов в висячей или раздавленной капле.

Для длительного наблюдения за живыми бактериями применяют специальные камеры (Пешкова, Фонбрюна).

Микроскопическое исследование позволяет определить форму, размеры и строение микроорганизмов, их взаимное расположение, подвижность, количество и распределение жгутиков, форму и положение спор, а также образование капсул. Для изучения подвижности берут молодые (не старше 6—8 час.

) быстрорастущие бульонные культуры. Жгутики легче обнаруживаются в молодых агаровых культурах, споры, наоборот, в культурах, выращенных в течение нескольких суток, а капсулы — в патол, экссудатах.

При микроскопии висячей капли лучше пользоваться темным полем или фазово-контрастным устройством. При этом следует учитывать, что формы и размеры микроорганизмов изменяются в зависимости от особенностей штамма, возраста культуры, состава среды, температуры инкубации и других факторов.

Тинкториальные свойства микробов определяют при окраске фиксированных препаратов. Окраска по Граму позволяет разделить все бактерии на 2 группы: грамотрицательные и грамположительные (см. Грама метод). Окраска по Цилю— Нельсену дает возможность дифференцировать кислотоустойчивые бактерии от некислотоустойчивых (см. Циля-Нельсена метод).

С помощью специальных методов выявляют отдельные элементы бактериальной клетки: нуклеоид, протоплазму и включения (методы Романовского— Гимзы, Фейльгена, Робино и др.), метахроматические гранулы (см. Нейссера методы и др.), жгутики, капсулы и споры. Метод флюоресцирующих антител делает возможным предварительное определение вида и даже типа микроба (см.

Иммунофлюоресценция) .

В случаях специфичности морфологии микроба путем микроскопического исследования можно предположительно идентифицировать его. В мед. микробиологии такого рода идентификация обоснована только тогда, когда она соответствует клин, диагнозу. Так, напр.

, кислотоустойчивые палочки в цереброспинальной жидкости больного с клин, симптомами менингита можно предварительно отнести к туберкулезным микобактериям.

Грамотрицательные биполярно окрашивающиеся овоидные палочки в соке лимф, узлов больного с паховыми бубонами в местности, где распространена чума, можно рассматривать предположительно как чумные бактерии.

Культуральные свойства указывают на принадлежность микроба к определенной группе и намечают направление дальнейших исследований в целях его окончательной идентификации. Их определяют путем посева изучаемой культуры на питательные среды (агар, бульон, уколом в желатину и др.).

Из культуральных признаков бактерий и грибков важное значение имеют внешний вид и внутреннее строение колоний, формирующихся при высеве культуры на плотные питательные среды. Если микроб не дает роста на обычном мясопептонном агаре, то должна быть применена другая, оптимальная для него среда.

Колонии обычно просматривают через 24 часа инкубации при t° 37°, а затем повторно с интервалом в 1 — 3 дня. При описании колоний обращают внимание на их размеры, цвет (пигментообразование), форму, профиль, поверхность, края, плотность. Если бактерии проявляют тенденцию к диссоциации на фазовые варианты (см.

Диссоциация бактерий), то их разделяют путем рассева на чашках Петри с питательной средой. При росте на жидких питательных средах отмечают придонность роста, рост в виде пленки или равномерное помутнение среды.

В некоторых случаях изучается рост на специальных средах, таких как сыворотка Леффлера, глицериновый картофель, среды, содержащие кровь, и др. Культуральные свойства микроба являются существенным дополнением к его морфол, признакам.

Резистентность микробов к различным факторам окружающей среды

Резистентность микробов к различным факторам окружающей среды используется при И. м., т. к. в ряде случаев микробы значительно отличаются по этому признаку. Так, напр., неспороносные бактерии и вегетативные формы спороносных бактерий чувствительны к температуре и к малым концентрациям антисептиков.

Они погибают при t° 60° в течение получаса и в 1% р-ре фенола в пределах 1 часа. Кислотоустойчивые бактерии чувствительны к температуре, но относительно резистентны к дезинфекционным средствам; они погибают при t° 60° в течение получаса, но на холоду противостоят антисептикам часто в течение нескольких часов.

Особо высокой устойчивостью обладают споры бактерий (см. Споры, бактерий). Они погибают либо от пара под давлением (при t° 120° в течение получаса) или от высоких концентраций антисептиков, напр, под воздействием 5% фенола в течение нескольких часов.

Поэтому при подозрении на образование микробом спор ставят пробы на резистентность к температуре.

Для определенных видов бактерий показательна их устойчивость к нек-рым антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам. Так, напр.

, одним из тестов, позволяющих дифференцировать классический холерный вибрион от вибриона Эль-Тор, а также Proteus mirabilis от других кишечных бактерий, служит способность вибриона Эль-Тор и Proteus mirabilis расти в присутствии полимиксина В (50 ед. в 1 мл и выше).

Особенности физиологии и биохимической активности

При определении биохимической активности микробов учитывают их отношение к кислороду, углекислоте и различным субстратам, оптимальную температуру роста, гемолитическую способность, а также влияние на их рост различных веществ, включая бактериальные факторы роста (см.).

По отношению к свободному кислороду микробы обычно делят на строгие аэробы (см.), строгие и факультативные анаэробы (см.).

Поэтому для выделения и идентификации возбудителя применяют специальные методы и питательные среды, способствующие росту только аэробных, факультативно-аэробных или анаэробных представителей.

Для большинства патогенных микробов оптимальная температура культивирования 37° (см. Бактерии).

Гемолитическая активность микробов определяется при выращивании их в чашках с кровяным агаром или же путем прибавления различных разведений бульонной культуры к взвеси отмытых эритроцитов.

Изучение влияния на рост бактерий различных биол, субстратов и хим. соединений (кровь, сыворотка, глюкоза, нитраты, соли желчных к-т, витамины, аминокислоты и др.) часто имеет значение для дифференциации этой группы микроорганизмов.

Для И. м.

большое значение имеют особенности ферментативной активности микробов, выявляемые на средах, содержащих сахара и спирты, белковые субстраты и жиры (липолитические свойства), что позволяет выявить тончайшие различия между близкородственными микробами. Важно также определение редуцирующих свойств бактерий и их способности образовывать индол, аммиак и сероводород, использовать цитраты и тартраты (см. Дифференциально-диагностические среды).

Антигенная структура и отношение к бактериофагу

Антигенная структура и отношение к бактериофагу и бактерицинам изучаются на завершающем этапе И. м. Выявление антигенного строения микробов осуществляют при помощи различных серол, реакций, напр, реакции агглютинации (см.), реакции связывания комплемента (см.) и др.

Если в развернутой реакции агглютинации испытываемый микроб агглютинируется до титра иммунной сыворотки или половины титра, то на практике его можно считать принадлежащим к тому виду (типу), каким обозначена данная сыворотка.

Для полной идентификации выделенный возбудитель должен агглютинироваться до титра иммунной сывороткой, приготовленной против эталонного микроба: испытуемый микроб должен адсорбировать из этой сыворотки все агглютинины.

С другой стороны, эталонный микроб должен агглютинироваться до титра сывороткой, приготовленной против изучаемого микроба, и также адсорбировать из этой сыворотки все агглютинины. Иными словами, должна быть полная перекрестная агглютинация и перекрестная адсорбция между обеими сыворотками и обоими микробами.

Реакция агглютинации иногда дополняется или заменяется реакцией преципитации (см.), а также реакцией непрямой гемагглютинации (с эритроцитами, нагруженными антителами). Серол, метод обнаруживает тончайшие различия между родственными микробами. Он часто является единственно доступным методом для дифференцирования подвидов или типов данного вида.

Широкое применение в лабораторной практике получили агглютинирующие монорецепторные сыворотки для идентификации сальмонелл, шигелл и других микробов. Весьма эффективно также применение метода иммунофлюоресценции (см.), который позволяет быстро (1 — 2 часа) осуществить И. м.

Чувствительным методом И. м. является типирование идентифицирующей культуры бактериофагом (см.). Этот метод используется, напр., при изучении брюшнотифозной палочки (см. Vi-брюшнотифозные фаги), т. к.

позволяет распознавать фаготип в пределах вида.

Специфические фаги применяют для дифференцирования шигелл, холерных вибрионов от холероподобных, классического холерного вибриона от вибриона Эль-Тор, чумной палочки от бактерий псевдотуберкулеза и других бактерий.

Для дифференцирования некоторых бактерий в пределах вида используют феномен бактериоциногении (см.), а также испытание чувствительности бактерий к бактерицинам различных типов (колицины, вибриоцины, пестицины, дифтериоцины и др.). Колицинотипирование нашло широкое применение для определения принадлежности выделенной культуры шигелл к определенному колицинотипу.

Патогенность для животных

Патогенность микробов обычно определяют в опытах на белых мышах, морских свинках и кроликах. Животных заражают подкожно, внутрикожно, внутримышечно, внутривенно, интраперитонеально, перорально, интраназально или интрацеребрально (см. Биологическая проба).

При изучении патогенных микроорганизмов иногда требуется определить, образуют ли они экзотоксины. С этой целью на чувствительных животных испытывается фильтрат бактериальной культуры, выращенной в течение определенного срока на соответствующей жидкой среде.

Экзотоксины высокотоксигенных бактерий (дифтерийной палочки, столбнячной бациллы, ботулинической бациллы и др.) вызывают заболевание животных с характерной клин, картиной и последующую их гибель с типичными патол ого анатомическими изменениями.

Для обнаружения некоторых микробных экзотоксинов применяют культуры чувствительных к ним тканей, а также куриные эмбрионы. Нейтрализация экзотоксинов специфическими антитоксинами играет существенную роль при И. м.

Библиография: Красильников Н. А. Определитель бактерий и актиномицетов, М.—Л., 1949, библиогр.; Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, М., 1973; Тим а ков В. Д. и Гольдфарб Д. М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии, М., 1958, библиогр.

; Bergey’s manual of determinative bacteriology, ed. by R. E. Buchanan a. N. E. Gibbons, Baltimore, 1975, bibliogr.; Cowan S. T. a. Steel K. J. Manual for the identification of medical bacteria, Cambridge, 1974; Identification methods for microbiology, ed. by В. M. Gibbs a. F. A. Skinner, v. 1—2, L.— N. Y.

, 1966—1968; International code of nomenclature of bacteria, ed. by S. P. Lapage a. o., Washington, 1975; M e у n e 1 1 G. G. a. M e y n e 1 1 E. Theory and practice in experimental bacteriology, Cambridge, 1970, bibliogr.; Nomura M. Colicins and related bacteriocins, Ann. Rev. Microbiol., v. 21, p. 257, 1967, bibliogr.; W i 1-s o n G. S. a. M i 1 e s A.

A. Topley and Wilson’s principles of bacteriology and immunity, v. 1—2, L., 1964.

А. В. Пономарев.

Источник: https://xn--90aw5c.xn--c1avg/index.php/%D0%98%D0%94%D0%95%D0%9D%D0%A2%D0%98%D0%A4%D0%98%D0%9A%D0%90%D0%A6%D0%98%D0%AF_%D0%9C%D0%98%D0%9A%D0%A0%D0%9E%D0%91%D0%9E%D0%92

Тинкториальные свойства – способность микроорганизмов окрашиваться

Что такое тинкториальные свойства

Каждый вид бактериальной клетки имеет определенные морфологические, ферментативные, культуральные и тинкториальные свойства. Изучая их, биологи устанавливают вид микроба, его характеристики и жизнедеятельность, особенности структур. Тинкториальные особенности, или свойства, дают возможность определить характеристики окрашенной бактерии.

Для чего нужно окрашивание?

Бактерии представляют собой полупрозрачные микроорганизмы, которые преломляют световые лучи. Учитывая эти их свойства, при обычной микроскопии без применения окрашивания они не видны. Определение микробов в мазках может осуществляться различными видами микроскопии:

  • аноптральная микроскопия;
  • фазово-контрастная;
  • в темном поле;
  • с опущенным конденсором.

Однако наиболее информативным метод исследования морфологических и культуральных свойств возбудителя считается изучение тинкториальных свойств убитых и окрашенных микроорганизмов.

Для микроскопического исследования тинкториальных свойств применяются в основном анилиновые красящие вещества. Существует две разновидности этого метода определения тинкториальных свойств – с использованием простой или сложной окраски микроорганизмов.

  1. Для простой окраски необходимо использование одного красителя – она применяется при необходимости проведения обзорной микроскопии, когда выполняется определение типа взаиморасположения бактерий и их формы.
  2. Сложная окраска требует последовательного применения нескольких красителей. Она используется для определения химических веществ в составе структур клетки (цитохимическое исследование), изучения деталей строения микроорганизмов.

Окрашивание по Граму. Кокки (шаровидные) — грамположительные и бациллы (палочки) — грамотрицательные

Тинкториальные свойства возбудителя представляют собой его восприимчивость к окрашивающему веществу, устойчивость к кислотам, щелочам, спиртам, равномерность окрашивания, особенности окраски по методу Грама, метахроматичность (окрашивание элементов клетки в цвет, не соответствующий цвету красителя).

Особенности разных бактерий при окрашивании

Морфологические и тинкториальные свойства бактерий различных типов отличаются. Рассмотрим наиболее часто встречающиеся их них.

Стафилококки

Наиболее часто требуется выявление тинкториальных свойств стафилококка у людей с гнойными заболеваниями кожи, слизистых, ранах, при абсцессах, сепсисе.

Морфология стафилококков представлена клетками шаровидной формы, диаметр которых в среднем составляет 0,8-0,9 мкм. В чистой культуре стафилококков выявляются скопления клеток, напоминающие грозди винограда, кучки.

Нередко определяют наличие стафилококков в гнойном содержимом в виде единичных, парных кокков, иногда – цепочки из нескольких элементов.

Окрашивание стафилококка для выявления тинкториальных свойств обычно проводят анилиновыми основными красителями.

Учитывая свойства стафилококка, можно дать следующую характеристику данных микроорганизмов: грамположительные кокки, не образующие капсул и спор, неподвижные.

В соответствии с культуральными и биохимическими свойствами стафилококка рост этих микроорганизмов наиболее активен при 37°С. Рост стафилококка на питательной среде при этом не зависит от наличия либо отсутствия кислорода.

Энтеробактерии

Одним из наиболее многочисленных семейств бактерий являются энтеробактерии. Важнейшее место среди таких микробов отводится роду эшерихий. Подобными свойствами обладают представители кишечной палочки рода сальмонелла и шигелла.

Такие бактерии представляют собой грамотрицательные палочки, которые достигают размеров 1-5 мкм длиной и 0,4-0,8 мкм шириной. Спор у кишечной палочки не бывает, однако некоторые виды способны образовывать капсулу. Эти палочки являются подвижными за счет жгутиков. Роды данных микробов подразделяются на виды в зависимости от того, какие ферментативные свойства характерны для них:

  • выделение сероводорода;
  • образование газа при процессе ферментации глюкозы;
  • расщепление лактазы.

Эшерихии

Морфологически клетки эшерихий имеют вид грамотрицательной прямой палочки, размеры которой составляют 2-6 мкм в длину и 0,4-0,6 мкм в ширину. Для эшерихий характерно наличие жгутиков, благодаря которым они подвижны. При посеве на твердые среды для эшерихий характерно прорастание колоний S- либо R-формы. При посеве на жидкие среды культура эшерихий дает осадок и помутнение.

Эшерихия коли (Escherichia coli)

С целью микробиологической диагностики эшерихий применяются испражнения (кишечный эшерихиоз), отделяемое раны, ликвор, моча, кровь. Однако для выявления и изучения палочки эшерихий наиболее информативен бактериологический метод исследования тинкториальных свойств.

Структурные особенности бактерий

В составе клетки микроба, как правило, есть стенка клетки (оболочка), цитоплазматическая мембрана, а также непосредственно цитоплазма, содержащая нуклеотид и включения (наличие гранул). Некоторые разновидности бактерий обладают жгутиками, пилями (фимбрии либо реснички), образуют споры либо капсулы.

Оболочка микроорганизмов определяет форму клетки, обеспечивает ее защиту от неблагоприятных воздействий окружающей среды, а также от повышения осмотического давления внутри бактерии.

Стенка микроба имеет сложную структуру и химический состав, которые различаются у грамположительных и грамотрицательных бактериальных клеток. Грамположительные микробы обладают толстой клеточной стенкой, содержащей тейхоевые кислоты и небольшое количество липидов.

Стенка грамотрицательных микробов состоит из полисахаридного и полипептидного слоев.

Наружная поверхность клеточной стенки покрыта слизистым слоем. У части микроорганизмов этот слой может увеличиваться за счет набухания, образуя при этом капсулу.

Она также имеет в своем составе полисахариды, иногда – полипептиды. Капсула маловосприимчива к красителям.

По этой причине для изучения таких микробов используют негативные методики тинкториального окрашивания структур бактерий (например, Бурри-Гинса).

Для части патогенных бактерий (например, пневмококка) характерно образование капсулы лишь в организмах человека либо животного.

При микроскопическом исследовании бактерии также обращают внимание на особенности окрашивания цитоплазмы и ее структур.

Окрашивание цитоплазмы может быть гомогенным (однородным) либо гетерогенным (определяются включения, или гранулы, неорганической и органической природы).

Для изучения включений клетки применяют также специальные методики окрашивания цитоплазмы (по Нейссеру). В составе цитоплазмы также определяют наличие таких структур, как ядро, или нуклеоид.

Окрашивание стрептококков

Это грамположительные микроорганизмы, которые выявляют методом окраски по Граму в мазках смыва лаважа бронхов, гноя, частицах ткани перикарда. Наиболее ярко данные бактерии окрашиваются синькой Леффлера. Они характеризуются расположением клеток подобно цепочке.

Окрашивание стафилококков

Отличие стафилококков от стрептококков заключается в том, что последние хорошо окрашиваются при выявлении тинкториальных свойств анилиновыми красящими веществами.

Морфологически в тканях либо выделениях больного хорошо определяются микроколонии стафилококков в виде тетрад. Исключительно по морфологическим и тинкториальным свойствам стафилококков трудно их дифференцировать от стрептококков.

Поэтому целесообразно также проведение бактериологического исследования на наличие стафилококка.

Окрашивание пневмококков

Выявление пневмококков происходит при исследовании цереброспинальной жидкости, промывных вод, а также легочной ткани, полученной при вскрытии.

Тинкториальные и морфологические свойства пневмококков выглядят так: они представлены грамположительными диплококками, покрытыми капсулой, расположенными в виде цепочки либо поодиночно.

Окрашивание пневмококков довольно эффективно анилиновыми красителями (например, метиленовым синим). Однако в случае наличия капсулы клетки необходимо специальное окрашивание.

Гранулоциты

Гранулоциты различаются по двум основным признакам структур клетки: наличие в толще цитоплазмы специфической зернистости (гранул) и сегментированного ядра. Каждый тип гранулоцитов содержит две разновидности гранул: специфические и неспецифические.

Под видом неспецифических гранул выступают особые формы лизосом – структур, которые содержат гидролитические ферментные вещества.

В зависимости от свойств специфических гранул в каждой клетке различают клетки базофилов, нейтрофилов и эозинофилов. Основное отличие нейтрофилов заключается в наименьшем размере гранул, составляющих всего 0,1-0,3 мкм. Состав этих гранул отличается содержанием фагоцитинов, лизоцима, а также щелочной фосфатазы. Основная функция нейтрофилов, как клеток человека, – защитная.

Бактерии и микроорганизмы

Работаю врачом ветеринарной медицины. Увлекаюсь бальными танцами, спортом и йогой. В приоритет ставлю личностное развитие и освоение духовных практик. Любимые темы: ветеринария, биология, строительство, ремонт, путешествия. Табу: юриспруденция, политика, IT-технологии и компьютерные игры.

Источник: https://probakterii.ru/prokaryotes/raznoe/tinktorialnye-svojstva.html

Тинкториальные свойства — основа микроскопирования бактерий

Что такое тинкториальные свойства

Многообразие бактериальных инфекций требует четкой идентификации возбудителя и определения его видовой принадлежности.

Определить тип микроорганизма микробиологам помогают его тинкториальные свойства — восприимчивость микроба к окрашиванию различными красителями. Этот способ позволяет исследовать морфологию возбудителя.

Тинкториальные свойства бактерий имеют большое значение для практических и теоретических исследований в области микробиологии.

Исследование микробов

В бактериологии существует много методов окрашивания микроорганизмов. Все они основаны на тинкториальных свойствах бактерий. Окрашивание позволяет определить их форму, строение, размер, взаимное расположение. Это позволяет решать проблемы систематизирования видов микроорганизмов общей биологии и сравнительной микробиологии.

Зачем их красить

Бактерии – это практически прозрачные организмы, и без применения окрашивания они плохо видны для обычной микроскопии. Можно использовать специальные виды микроскопии (фазово-контрастную, в темном поле) для изучения объектов, но наиболее простым способом является окрашивание, после которого бактерии становятся видны в обычный световой микроскоп.

Подготовка образца

Вне зависимости от применяемой методики окрашивания, существуют единые правила подготовки исследуемого объекта. Обязательными являются следующие стадии:

  • Стерильными инструментами делается мазок на предметное стекло.
  • Образец подсушивается. Это делается при комнатной температуре либо с использованием сушильных шкафов.
  • Далее следует стадия фиксации – специальными составами микроорганизмы прикрепляются к стеклу.
  • Собственно окрашивание – образец покрывается красителем на фиксированный период времени, после чего его смывают.
  • Окончательная сушка – образец снова высушивается.

Чаще всего используются красители на основе анилина с разными значениями кислотных показателей (рН). Большинство красителей – порошки, которые разводят в спирте.

Красители, в которых красящими агентами являются катионы, называются основными (рН больше 7). С их помощью можно окрасить микроорганизмы в красный (фуксин, сафранин), фиолетовый (метилвиолет, тионин), синий (метиленовая синь), зеленый (малахитовая зелень), коричневый (хризоидин) и черный (индулин) цвета.

Красители, в которых красящими агентами являются анионы, называются кислотными (рН меньше 7). Они покрасят образец в красный (эозин), желтый (пикрин) или черный (нигрозин) цвета.

Есть группа нейтральных красителей (например, родамин В), где красящими агентами выступают и катионы, и анионы.

Культура живая или мертвая

Методы окрашивания делятся на две группы в соответствии с жизненной формой исследуемого образца.

  • Витальное (прижизненное) окрашивание. Этот метод исследования свойств микроорганизмов используется при изучении живых тканей, что позволяет наблюдать за процессами жизнедеятельности микробов.

    Для такого окрашивания используются красители с низкой токсичностью и высокой проникающей способностью.

  • Поствитальное окрашивание. Это окрашивание мертвых или умерщвленных микроорганизмов.

    Благодаря тинкториальным свойствам бактерий, микробиологи определяют их структуру. Именно такое окрашивание применяется наиболее широко.

Грамположительные и грамотрицательные

Именно такие характеристики бактерий можно встретить в инструкциях к различным медицинским препаратам. Этот способ изучения тинкториальных свойств бактерий основан на использовании генциантового фиолетового красителя и фиксации йодом. Это методика Ганса Кристиана Грама, датского врача, который предложил ее в 1884 году. В результате такого окрашивания бактерии делятся на две группы:

  • Грам (+) – окрашиваются в синий цвет (стафилококки и стрептококки).
  • Грам (-) – окрашиваются в цвет от розового до красного (энтеробактерии, сальмонеллы, кишечные палочки).

Различный результат окрашивания получается из-за неодинаковых тинкториальных свойств стенок бактерий. Метод окраски Грама и сегодня является основным при диагностике некоторых инфекционных болезней.

Другие методики окрашивания

Дадим характеристику еще нескольким методикам, широко применяемым в бактериологии.

  • Метод Циля-Нельсона – определяет кислотную устойчивость бактерий. По ней выявляют возбудителей туберкулеза и микобактериоза.
  • Методика Романовского-Гимзе – окрашивает ацидофильные (уксуснокислые и молочнокислые) бактерии в красный, а базофильные (спирохеты и простейшие) – в синий цвет.
  • Методика Морозова – окрашивает бактерии в коричневый цвет и делает видимыми их жгутики.

Окрашивание фукцином Циля позволяет увидеть споры бактерий. Имея после окрашивания розовый цвет, они хорошо видны на фоне голубых бактерий. Этот метод также является инструментом бактериологии и имеет большое практическое значение.

Поделитесь ссылкой и ваши друзья узнают, что вы знаете ответы на все вопросы. Спасибо ツ

Источник: https://News4Auto.ru/tinktorialnye-svoistva-osnova-mikroskopirovaniia-bakterii/

Все о медицине
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: